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上海市计量科学研究院生物识别技术创新团队为用于诊断新型冠状病毒的PCR仪提供现场校准服务,确保设备性能良好,检测结果准确可靠。
快速、准确诊断新型冠状病毒感染的肺炎疑似病例,对于及时收治患者、隔离患者、阻断病毒传播具有重要意义。 根据国家卫健委发布的《新冠肺炎诊疗方案(试行第五版)》,实时荧光RT-PCR检测被列为确诊病例的两种方法之一,由于具有时间短、成本低的特点,已成为目前应用最广泛的新型冠状病毒诊断方法。 疫情发生后,上海各医院检验科室、疾控中心、核酸检测生物技术企业对PCR仪器的校准需求猛增。
消息
上海市计量科学研究院为企业提供PCR仪器上门校准服务
上海杰诺生物科技有限公司作为我国首家获得“新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒(荧光PCR法)”医疗器械注册证的企业,近日委托上海市计量科学研究院生物识别技术创新 团队为其PCR仪器提供现场校准服务,确保良好的设备性能和准确可靠的检测结果。
上海市计量测试技术研究所是国内最早开展PCR仪器计量校准并获得社会公用计量标准证书的单位之一。
获得上海市计量科学研究院社会公用计量标准证书
为实现PCR仪的计量校准,保证病毒核酸检测结果的溯源性、准确性和可靠性,上海市计量科学技术研究院生物识别技术创新团队进行了一系列技术积累。
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研发DNA标准物质,确认PCR仪示值误差校准
上海市计量科学技术研究院基于多年技术积累,研发出高纯度核酸标准物质研制技术,已获批30余种国家一级、二级标准物质,具有相对扩大的不确定度小于 5%。 DNA标准物质就像核酸检测过程中的“砝码”,可用于一系列核酸定量分析过程的溯源。 标准品经系列稀释后可制成浓度范围为(10²~10¹⁰)拷贝/μL的样品,可作为DNA模板制备PCR反应体系,制备PCR仪校准板,可以检查PCR仪的样品指示误差和样品线性度。 等定量指标进行标定。
上海市计量科学研究院研制的DNA国标物质
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研制出PCR仪“测温体检”多通道PCR测温仪
PCR仪的温度精度对于核酸检测非常重要,温度不均匀会造成“假阴性”结果。 多通道PCR体温计由15个精密温度传感器和数据采集分析模块组成。 可实现静态测温、动态温度跟踪和多通道检测,可校准PCR仪的温度示值误差、温度均匀性、平均升温降温速率等温度指标。
体检PCR仪测温多通道PCR测温仪
上海市计量科学研究院将通过高效、快速、高质量的检测校准,使病毒PCR检测更加准确,数据更加可靠,为打赢疫情防控阻击战作出贡献。
冠状病毒结构示意图,尖刺形成类似冠状的“皇冠”上海分析仪器公司,因此得名
摘自美国微生物学会
什么是实时荧光RT-PCR检测?
新冠病毒的遗传信息“写”在它的RNA(核糖核酸,生物细胞和部分病毒、类病毒中存在的遗传信息载体)和稳定的双螺旋DNA(脱氧核糖核酸,它是病毒的载体) biological cells) 与其中所含的四种生物大分子之一的核酸不同,单链RNA分子非常灵活多变,使病毒获得了更高的变异性。 2003年的SARS冠状病毒就是一个例子。 所以最终,我们的目标是准确检测病毒的RNA。
实际收集到的 RNA 可能很难检测到。 那么如何准确检测病毒RNA呢?
实时荧光RT-PCR仪(即“实时荧光逆转录聚合酶链反应仪”)与冠状病毒检测试剂盒配套使用,可用于病毒RNA的测定。 先将RNA转化为DNA,再进行PCR扩增,将核酸放大数百万倍。 这时候,检测就变得容易多了。 该方法由于时间短、成本低,已成为目前应用最广泛的新型冠状病毒诊断方法。
然而,实际检测并不是那么容易。 RT-PCR检测所用的PCR仪和检测试剂盒会影响最终结果,造成假阴性和漏检。 因此,必须对PCR仪进行校准上海分析仪器公司,以保证检测结果的溯源性。
根据JJF 1527-2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》的要求,可采用合适的核酸标准物质校准PCR仪的样品示值误差、样品线性度等定量指标; 多通道温度计可用于校准PCR仪。 校准温度指示误差、温度均匀性、平均升温降温速率等温度指标。
校准PCR仪时应该注意什么?
1、温度探头配合的影响
测温探头的形状应与PCR反应良好贴合,尺寸误差应小于1mm。 PCR仪的生产厂家和型号很多。 虽然反应孔的尺寸由行业统一规定,但反应孔高度有0.1mL和0.2mL两种不同型号。 不同的仪器有不同的打开样品室的方式,这会影响温度测量。 探针适配带来了新的挑战。
2. PCR反应体系制备的影响
PCR仪多为96孔,有条件的加样用排枪,减少单孔加样的误操作; 反应体系中DNA体积占总体积的20%,这样最好避免抑制DNA对实验的干扰,避免DNA溶液过少造成的误差。 如果校准人员操作不熟练,建议使用准备好并经过验证的PCR校准反应板。
3、标准物质系列稀释操作的影响
严格按照规范要求,使用合格的电子天平进行称量和稀释,不能直接使用移液器进行稀释,否则会大大增加核酸定量结果的不确定性。
4、核酸反应试剂耗材的兼容性
不同PCR仪之间耗材的匹配不一定兼容。 除了体积不同,反应帽的形状也不同。 比如罗氏和ABI的反应管是不一样的。 国内部分公司的瓶盖弧度明显,不匹配的反应管瓶盖可能会被PCR仪105℃的热盖融化。
为了使荧光定量PCR仪器的校准更加高效和规范,需要了解每个检测环节可能出现的误差及其影响因素,避免不必要的工作失误,使校准结果更加准确可靠。
上海计量检测
筑基万业,溯源价值
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